该流程按照Qiagen的Qproteome® FFPE Tissue Kit来进行,该试剂盒适用于FFPE样本或福尔马林固定样本中纯化全长蛋白。
组分 | 37623 20次 |
Extraction Buffer EXB Plus | 2X1mL |
Collection Tubes (1.5 ml) | 50 |
Collection Tube Sealing Clips | 20 |
如果用的是其他品牌的试剂盒,可以参考其说明书进行操作。
实验步骤
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使用前的准备
(1) Extraction Buffer EXB Plus保存至-20°C。其他室温保存。
(2) 需自行准备β-巯基乙醇,按照向每94μl Extraction Buffer EXB Plus中添加6μl β-巯基乙醇处理单样本进行配置。
(3) FFPE样本需先试用二甲苯或其他脱蜡液进行脱蜡处理。FFPE样本提取步骤
(1) 将脱蜡处理好的样本中加入100μL配置好的Extraction Buffer EXB Plus溶液,盖盖后手动旋转混合。
(2) 在冰上孵育5min,涡旋混匀。100°C加热20min。
(3) 使用热混合器,在80°C下孵育2h,搅拌速度为750rpm。取出后4°C孵育1min。
(4) 4°C 14000g离心15min,取上清转移至Collection Tube中,即为蛋白。