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1.1.16 FFPE样本蛋白抽提

| 1.2.1 紫外吸光光度法

该流程按照Qiagen的Qproteome® FFPE Tissue Kit来进行,该试剂盒适用于FFPE样本或福尔马林固定样本中纯化全长蛋白。

组分  37623 20次 
Extraction Buffer EXB Plus  2X1mL 
Collection Tubes (1.5 ml)  50
Collection Tube Sealing Clips  20

如果用的是其他品牌的试剂盒,可以参考其说明书进行操作。

实验步骤

  • 1
  • 2
  • 1

    使用前的准备

    (1)  Extraction Buffer EXB Plus保存至-20°C。其他室温保存。


    (2)  需自行准备β-巯基乙醇,按照向每94μl Extraction Buffer EXB Plus中添加6μl β-巯基乙醇处理单样本进行配置。


    (3)  FFPE样本需先试用二甲苯或其他脱蜡液进行脱蜡处理。

  • 2

    FFPE样本提取步骤

    (1)  将脱蜡处理好的样本中加入100μL配置好的Extraction Buffer EXB Plus溶液,盖盖后手动旋转混合。


    (2)  在冰上孵育5min,涡旋混匀。100°C加热20min


    (3)  使用热混合器,在80°C下孵育2h,搅拌速度为750rpm。取出后4°C孵育1min


    (4)  4°C 14000g离心15min,取上清转移至Collection Tube中,即为蛋白。

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