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1.1 样品类型

| 1.1.1 常规哺乳动物贴壁细胞

在样品制备前期,针对有些样品,需要加入特定的激动剂/抑制剂等处理之后在进行收集。
不同样品类型处理方法也各不相同,以下根据不同样品类型的处理方法做了个归类整理。

样本类型&注意事项

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  • 2
  • 3
  • 1

    主要样本类型如下

      常规哺乳动物贴壁细胞      哺乳动物悬浮细胞      哺乳动物软组织      动物血液样品        骨组织        细菌      真菌      昆虫细胞      植物组织    ⑩  膜蛋白    ⑪  细胞器/亚细胞器        细胞核/质蛋白组分        线粒体/胞浆组分    ⑭  内质网组分    ⑮  外泌体组分    ⑯  FFPE样本  

  • 2

    注意点主要有以下几点

    尽量使用新鲜的样本,或分装保存样本,避免反复冻融


    准备样品前:
    了解样品的表达情况:可通过Biogps、Atlas、Uniprot、PSP等网站进行查询,或者查找相关参考文献


    样品预处理:
    1、 大多数修饰类蛋白需要经过诱导才能检测到
    2、 设置预处理阳性和阴性对照


    样品裂解:
    1、 根据靶蛋白来源于细胞质、细胞核或者细胞膜来选择裂解强度不同的裂解液
    2、 样品裂解时及时加入蛋白酶和磷酸酶抑制剂,防止靶蛋白的降解
    3、 针对来源于细胞核或者组织的样品需要经过适当的超声处理,使样品充分释放

  • 3

    各种工具的功能如下

    Uniprot:(点击观看Uniprot使用指南
    1、查询蛋白的定位、修饰、分子量等基本信息
    2、查询蛋白质序列
    3、查找同源性高的蛋白


    Proteinatlas:(点击观看Protein Atlas 操作视频
    1、查询蛋白的定位、基本信息
    2、查询蛋白在人细胞、正常组织和癌变组织中的表达情况


    Biogps:
    查询蛋白在不同种属和不同组织中的表达情况


    PSP:
    查询蛋白翻译后修饰位点信息

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