准确度和灵敏度高,试剂稳定性好,兼容去垢剂,操作相对复杂
实验步骤
- 1
- 2
- 3
- 4
绘制标准曲线
BSA 最好用与样本相同的溶液进行稀释,通常情况下,为了经济方便,可用蒸馏水稀释。稀释好的BAS配成不同浓度的标准品,建议设置5组以上浓度梯度的标准品,可参考以下浓度梯度进行设置:20,125,250,500,750,1000,1500ug/mLBSA,然后每孔加20ul,做两组重复,待测。建议每种浓度做2~3个复孔。
BCA工作液的准备
将A液和B液按照50:1的比例混合后得到工作液。注意:当B液加入A液时,可看见浊度,轻轻晃动后消失,工作液为绿色;
样品检测
在96孔板中加入适当体积的样品,用蒸馏水将样品体积补至20ul。在各孔(标准曲线孔和样品孔)中分别加入180ul BCA工作液,37度 孵育30min;
在562nm处测其吸光度值,绘制标准曲线
用酶标仪检测各点的吸光度值,并记录。根据标准品的数值做出标准曲线,然后计算出相应的样品浓度。