常规哺乳动物贴壁细胞蛋白提取操作步骤:
实验步骤
- 1
- 2
- 3
- 4
弃培养基/漂洗
轻轻倒掉培养皿或者培养瓶中的培养基,并吸掉残余液体,按照10cm的培养皿加1ml的预冷PBS,润洗3次,洗掉残余培养基,吸掉PBS;
裂解
将培养皿放在冰上,往10cm的培养皿加500μl的细胞裂解液,裂解液需要提前加入蛋白酶和磷酸酶抑制剂,冰上裂解10—20min;
收集样品
裂解好之后,用干净的细胞刮快速刮下来,收集细胞碎片和裂解液,转移至1.5ml EP管中,整个过程需在冰上进行;
离心取上清
4°C 12000rpm离心5min,收集上清,分装保存于-20°C或者-80°C中备用。