1.1.4 动物血液蛋白

(1)  血液取出后保存在抗凝管内，后在4°C条件下3000rpm离心5min;

(2)  吸走上层血清，下层红细胞用冰的1XPBS洗3次;

(3)  随后在冰浴下加入0.25XPBS和适量的蛋白酶抑制剂，溶解红细胞，溶解时间持续30min，裂解好之后样品即制备好了，分装保存于-20°C或者-80°C中备用;

(4)  如果需要分开收集血红蛋白和红细胞膜蛋白，则可继续以下步骤。4°C条件下14000rpm离心5min，上清即为含有血红蛋白的样品，沉淀为红细胞膜成分，分开保存备用。

(1)  血液取出后保存在抗凝管内，加入适量红细胞裂解液，孵育5min，使红细胞充分裂解;

(2)  50g离心5min，丢弃上清，沉淀即为免疫细胞沉淀;

(3)  加适量的细胞裂解液，裂解液需要提前加入蛋白酶和磷酸酶抑制剂，冰上裂解10—20min;

(4)  4°C 12000rpm离心5min，收集上清，分装保存于-20°C或者-80°C中备用。

如需研究某种特定免疫细胞，可利用磁珠分选的方法先将特定细胞群分选出来，再进行研究。

(1)  用密度梯度离心法将血小板分离出来;

(2)  加适量的血小板裂解液，裂解液需要提前加入蛋白酶和磷酸酶抑制剂，冰上裂解10—20min;

(3)  4°C 12000rpm离心5min，收集上清，分装保存于-20°C或者-80°C中备用。