骨组织总蛋白提取操作步骤
此方法适用于从各种动物骨组织样品中提取总蛋白。可以提取各种密质骨与松质骨、软骨组织样品。可以选择购买商品化的骨组织蛋白提取试剂盒能充分裂解骨细胞，成骨细胞、破骨细胞，提取的蛋白可用于 Western Blot、蛋白质电泳等下游蛋白研究。
实验步骤
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取材
取新鲜骨组织样品，将骨外膜剔除干净之后，在预冷的生理盐水中充分浸泡(换液一次)，然后用蒸馏水清洗，去除血液、红细胞;
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研磨
将骨组织敲碎，称重后放入装有液氮的研钵中，磨成粉末，保持液氮不能完全挥发，如果太干太硬不方便液氮研磨可以直接加入少量提取液后研磨;
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裂解
将骨组织粉末加入离心管中，每100mg骨组织加入200ul-300ul蛋白裂解液和适量的蛋白酶抑制剂;
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混匀/涡旋
混匀后冰浴30min，每隔5min在漩涡混合仪上振荡20s，以免粉末沉淀，提取不充分;
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离心
4°C，12000rpm 条件下离心 15 min;
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取上清
将上清转移到新的离心管中，即得到骨组织总蛋白。提取好的蛋白可以分装保存于-80°C中备用。
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注意事项:
(1)在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物;
(2)实验过程中的所有试剂建议-20°C冰箱预冷，整个过程最好保持样品处于低温状态;
(3)如果商品化的提取试剂盒中没有添加蛋白酶抑制剂，可以在步骤3中加入1X 使用浓度的蛋白酶抑制剂。