Two-Step RT-PCR Kit

Two-Step RT-PCR Kit两步法RT-PCR试剂盒具有高效合成能力和高扩增效率。该试剂盒能以动物、植物和微生物的总RNA或mRNA为模板，用2×1st Strand cDNA Synthesis SuperMix进行反转录，然后用2×HotStart Taq Master Mix进行扩增。本试剂盒含有从RNA到cDNA，以cDNA为模板进行扩增的全部试剂，本试剂盒RT 50次/PCR 200次。 

产品特点:

操作简单：操作步骤少，降低污染。

特异性高：使用HotStart Taq酶进行扩增，减少非特异性反应。 
产品组分：

实验方法：

第一链 cDNA 合成：

试剂融化后，将试剂盒中各组分混匀并稍微离心后置于冰上。

（1）按顺序加入以下反应物：

可选步骤：如果 RNA 模板 GC 含量高或者含有二级结构，可先将RNA 模板和 RNase Free Water 混匀后，65°C  孵育 5 分钟（有助于打开高级结构，便于下一步反应的进行），迅速置于冰上冷却，再加入其它组分。

（2） 轻轻混匀，离心。

（3）42°C 孵育 15-30 分钟（如果 RNA 模板中不含 poly A 结构，25°C 先孵育 5 分钟，随后 42°C 孵育 15-30 分钟）。

（4）产物可直接用于下一步反应。如果不立即使用， 可于-20°C保存一周，长时间保存建议-70°C放置。

第一链 cDNA 的 PCR 扩增：

合成的第一链cDNA可直接用于PCR。

常用反应体系（20μl）：

常用 PCR 循环：

当扩增片段＜3K

当扩增片段≥3K（推荐引物长度≥30bp）