
牛痘病毒加帽酶,来源于携带牛痘病毒 MR的重组大肠杆菌菌株,由 D1R 和 D12L 两个亚基组成,兼具三种酶活性(RNA 三磷酸酶活性、鸟苷酸转移酶活性和鸟嘌呤甲基转移酶活性)。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子结构的有效酶,能特异性地将 7-甲基鸟苷酸帽子结构(m7Gppp,Cap 0) 加至 RNA 的 5‘端。帽子结构(Cap 0)对真核生物 mRNA 的稳定、转运和翻译有着重要的作用。通过酶促反应给RNA 加帽是一种有效简单的方法,能显著改善用于体外转录、转染和显微注射的 RNA 的稳定性和翻译能力。
产品组分:
组分 | 不同规格各组分体积 | ||
500U | 2000U | 10000U | |
牛痘病毒加帽酶(10 U/μL) | 50 μL | 200 μL | 1 mL |
10×加帽缓冲剂 | 100 μL | 400 μL | 2×1 mL |
储存缓冲液:
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.1% Triton X-100, 50% glycerol.
活性定义:
在 37℃条件下,1 h 内将 10 pmol GTP 完全掺入到 80 nt 转录产物所需的酶量定义为 1 个活性单位(U)。


≥90%



2、用于加帽反应的 RNA 在使用之前应进行纯化并溶解于无核酸酶水。溶液中不能含有EDTA 和盐;
3、5'末端标记反应体系中, GTP 储液应稀释为反应体系中 mRNA 摩尔浓度的 1-3 倍;
4、反应体系体积可根据实际需求按比例进行放大或缩小。

质量控制:
核酸外切酶活性:10 U的本品和1 μg λ-Hind III digest DNA 在 37℃下反应 16 小时,DNA的电泳谱带不发生变化;
核酸内切酶活性:10 U 的本品和 1 μg λDNA在 37℃下反应 16 小时,DNA 的电泳谱带不发生变化;
切口酶活性:10 U 的本品和 1 μg pBR322 在 37℃下反应 16 小时,DNA 的电泳谱带不发生变化;
RNase活性:10 U的本品和1.6 μg MS2 RNA 在 37℃下反应 4 小时,RNA 的电泳谱带不发生变化;
大肠杆菌 DNA 残留检测:10 U 本品中残留的核酸经 E.coli 16s rDNA 特异性的 TaqMan qPCR 检测,E.coli 基因组残留≤1 拷贝;
细菌内毒素(Endotoxin):LAL-Test,中国药典 2020 版第四部凝胶限度试验法 通则(1143),细菌内毒素含量≤10 EU/mg。

-20℃以下保存,避免反复冻融或频繁暴露于温度变化中,首次使用时建议进行分装。