单细胞悬液制备集锦

对于要进行细胞培养，单细胞测序，细胞分型检测，细胞分选，提蛋白/RNA、抗体批量生产等实验的老师来说，获得高质量的细胞是实验成功的第一步，那细胞从何而来？

一部分老师选择使用细胞系开展实验，比如BHK细胞系（幼地鼠肾细胞），Vero细胞系（非洲绿猴肾细胞）、Hep-2细胞系（人喉表皮样癌细胞）……

也有一部分老师选择获取原代细胞，可以是源于血液中的细胞，比如：人外周血中免疫细胞（T、B、NK、Mo细胞）等；源于组织样本中的细胞，比如：小鼠脾脏中的免疫细胞、肿瘤组织中的TIL细胞等；源于贴壁细胞，比如单核诱导贴壁后形成的巨噬细胞、树突状细胞等；源于悬浮细胞，比如：腹水中的免疫细胞。

针对不同的样本类型，如何制备高质量的单细胞悬液，小编为您一一讲述。

（1）外周血样本

对于病人外周血，我们要先对其进行Ficoll密度梯度离心，根据不同细胞密度不同，进而将其处理成PBMC（单个核细胞），操作流程如下：

•获取抗凝全血，用PBS进行2-4倍稀释； •按照1:1比例，加入Ficoll试剂和稀释后的样本；

•20℃，400xg离心30min；（具体参见说明书） •离心结束，细胞分层，白膜层即为PBMC

附件：人外周血样本中不同免疫细胞占比如下：

（2）组织样本

如果从组织样本中提取原代细胞，问题来了？是否需要用酶消化？选择什么样的酶？消化多长时间？如何终止消化？

常见的组织类型：小鼠脾脏、肝脏、心脏、肺脏、脑组织、肿瘤组织、人肿瘤组织、皮肤组织……

传统组织处理方法

▶机械法：剪碎法、网搓法、研磨法

•适用样本类型：脾脏、淋巴结、胸腺

▶酶解法：胰蛋白酶类、胶原酶、溶菌酶、弹性蛋白酶

•适用样本类型：肝脏、肾脏、心脏、肺脏、脊髓、脑、肠道、皮肤、肿瘤等；

GentleMACS组织处理法

•原理：结合机械法和酶解法，轻轻松松完成高得率，高活性的单细胞悬液制备，无须考虑用什么酶；无须考虑如何终止、无须考虑孵育时间，一起看看如何实现的吧？

•应用：美天旎公司推出的产品gentleMACS 全自动组织处理器（gentleMACS Dissociator），可以温和、安全、省时、自动化的从组织中分离单个细胞悬液，及将组织块制备成匀浆。

免疫学	小鼠的脾脏、大鼠脾脏、人类组织的扁桃腺以及肿瘤免疫和肿瘤干细胞研究用的实体瘤组织
神经科学	胚胎、成体动物的大脑（大鼠或小鼠）。联合使用gentleMACS和MACS神经组织分离试剂盒，可以快速方便地从脑组织中分离样品，避免了传统机械分离方法的繁琐操作
干细胞和组织再生	使用一些小鼠和人组织（脑，肝脏，肾，皮肤，肌肉，心脏，实体瘤等）研究组织和组织再生相关标本来源的非造血干细胞
细胞生物学	内皮细胞和表皮
分子生物学	配合M管，可以分离亚细胞物质，如核酸和蛋白质。M管可以处理不同体积的标本，最多达10ml

•操作视频

示例：小鼠肿瘤组织消化成单细胞悬液

相关产品推荐

用途	产品名称	货号	规格
肿瘤组织解离试剂盒，小鼠	Tumor Dissociation Kit, mouse	130-096-730	50 T
过滤细胞团块或细胞碎片	MACS SmartStrainer（70 μm）	130-098-462	50个
gentleMACS C 管	gentleMACS C tube	130-093-237	25个
带加热模块的全自动组织处理器	gentleMACS Octo Dissociator with heaters	130-096-427	Set
*MACS 组织保存液（保存新鲜组织48h）	MACS Tissue Storage Solution	130-100-008	100 mL
*红细胞裂解液（10×）	Red Blood Cell Lysis Solution (10×)	130-094-183	50 mL

（3）贴壁细胞

贴壁细胞（adherent cells）:活体体内细胞当离体置于体外培养时大多数以贴壁方式生长，主要包括正常细胞（例如：成纤维细胞、巨噬细胞、神经胶质细胞、心肌细胞以及肝、肺、肾、乳腺、皮肤细胞等）和肿瘤细胞。

•胰蛋白酶消化

胰蛋白酶：最常用，浓度一般0.25%-5%，37℃消化时间一般1-5min，用血清终止；胶原酶：一般用于组织样本消化成单细胞，作用温和，用血清终止。

•离子螯合剂

EDTA：用的比较多，一般浓度在0.02%左右；商品化无酶消化液：分离成单细胞作用强，但是对细胞损伤比较大。

（4）悬浮细胞

悬浮细胞包括临床上常见的胸腹水细胞，尿液，脱落细胞等，这些细胞经过简单处理，就可以应用于下游流式分析，细胞分选，细胞培养等实验，具体操作见：悬浮细胞单细胞悬液制备。