Reference：OMIP-94 Twenty-four-color (thirty-marker) panel for deep immunophenotyping of immune cells in human peripheral blood.
OMIP是国际流式学会旗下Cytometry PART A杂志中的专栏，全称为：Optimized Multicolor Immunofluorescence Panels。目的是为多色方案的科研人员提供素材，减少其方案的开发时间，提高实验效率。
一、实验信息
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二、配色方案
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三、圈门逻辑+流式图
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在排除粘连体后，根据CD45与SSC-B-A的性质对白细胞[1]进行门控。引入中性粒细胞和嗜酸性粒细胞(CD45mid/low和SSC-B-Ahigh)。根据SSC-B-A和CD16的表达区分中性粒细胞和嗜酸性粒细胞[2]。根据CD177的表达将中性粒细胞进一步细分。根据CD45表达和SSC-V-A区分单核细胞和淋巴细胞[2]。然后将单核细胞[3]分为HLA-DR表达，并根据CD14和CD16表达分为经典(CD14+CD16-)、中间(CD14+CD16+/低)和非经典(CD14-CD16+)。为了进一步分类树突状细胞(DC)[5]、先天淋巴样细胞(ILCs)[6]和嗜碱性细胞[7]、白细胞[4]，对CD4-CD3-CD8-CD14-CD19-进行了圈门。树突状细胞[5]被鉴定为CD16- HLA-DR+。此外，基于CD123表达鉴定浆细胞样DC (pDC)，基于CD11c表达鉴定髓细胞样DC (mDC)。在谱系阴性细胞中，根据CD127表达和CD56+ ILCs分类ILCs[6]。嗜碱性粒细胞[7]在谱系阴性细胞中被鉴定为CD123+CD38+细胞。
从淋巴细胞[2]门来看，确定的群体如下。在CD3-CD4-淋巴细胞[8]中，根据HLA-DR表达[9]进行细胞分层。在HLA-DR-细胞中，基于CD16和CD56表达NK[10]，将细胞细分为CD16+CD56+(成熟NK细胞)、CD16+CD56-(早期NK细胞)和CD16+CD56-(晚期NK细胞)。
此外，在成熟NK细胞中，估计了CD57的表达。B细胞[11]鉴定为CD3-CD4-CD16-HLA-DR+CD19+细胞。B细胞进一步被门控为CD38+IgD-(浆母细胞)、CD38-IgD(记忆)和CD38-IgD。CD38-IgD+细胞进一步分为CD27+IgD(边缘区B细胞)和CD27-IgD(初始)。使用另外两种标记CD24和CD38，将B细胞分为CD24highCD3ghigh (Breg细胞)、CD24+CD38-(记忆B细胞)、CD24-CD38high(浆母细胞)和CD24-CD38-(成熟幼稚B细胞)。
在CD3+淋巴细胞[12]中鉴定出TCRδ2细胞(γδ+62+)。在cd3γδ TCR-细胞中，iNKT细胞被鉴定为TCRVa24+。在TCRVa24-细胞中，MAIT细胞被描述为TCRVa7.2+ CD161+细胞。在剩余的TCRVa7.2- cd161和TCRVa7.2+细胞(非MAIT细胞)中，NKT细胞被描述为CD3+CD56+细胞。在CD3+CD56-细胞[13]中发现了常规T细胞群CD4+、CD8+、双阴性(DN)和双阳性(DP)。在CD4+细胞中，T调节细胞被鉴定为CD25high和CD127low细胞[14]。在Treg细胞中，定义了两个主要的细胞群:CD39+(记忆)和CD45RA+(幼稚)Treg。
在图中，显示了CD4+(A)和CD8+(B)细胞基于CD45RA和CD62L标记物表达的分化，这些标记物与CD27一起有助于确定主要分化阶段:幼稚(CD27+CD45RA+CD62L+);中央记忆(CD27+CD45RA-CD62L+);过渡记忆(CD27+CD45RA-CD62L-);效应记忆(CD27-CD45RA-CD62L-);末端效应(CD27-CD45RA+CD62L-)。此外，除了分化状态外，CD4+(A)和CD8+(B)细胞的激活状态通过表达CD38、CD57、CD69、CD94、HLA-DR和PD-1来表达。基于上述相同标记的激活状态也描述了Tregs (C)， MAIT (D)， NKT细胞(E)和yoT细胞(F)。对于每种细胞类型，显示了FMO对照。此外，在γδT细胞中，(CD45RA++CD62L-)、(CD45RA-CD62L-)和CD62L+ γδT细胞呈现分化状态。
逻辑圈门图：
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