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原核表达系统是蛋白表达和纯化中应用最早,最广泛,效率很高的经典表达系统。常用的是大肠杆菌表达体系,具有培养简单,周期短,成本低,表达水平高等特点。大肠杆菌表达体系蛋白纯化的主要流程为:PCR扩增目的片段——将基因片段克隆到表达载体上——转化表达宿主菌——优化诱导表达目的蛋白——纯化目的蛋白本解决方案为大家详细介绍原核细胞标签蛋白纯化从质粒构建到蛋白表达到蛋白纯化每个过程的详细步骤以及操作技巧,供大家参考。
1. 质粒构建
1.1 目的基因扩增及表达载体选择
1.2 酶切和连接
1.3 阳性克隆株筛选和鉴定
2. 蛋白表达
3. 蛋白纯化