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聚合酶链式反应,简称PCR(Polymerase Chain Reaction)。是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究,还可用于疾病的诊断。实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)是一种可以定量的PCR方法。通过荧光信号,对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期,模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,所以成为定量的依据。
核酸稳定与纯化 ► 逆转录 ► PCR/qPCR ► 凝胶电泳或数据分析
1. 样本核酸稳定与保存
2. 样本核酸纯化
2.1 DNA纯化
2.2 RNA纯化
3. 逆转录(cDNA合成)
4. 引物设计
5. 终点法PCR
6. 凝胶电泳
7. 荧光定量PCR(qPCR)
7.3 PCR定量方法
8. 数字PCR
9. 参考基因和对照